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小鼠固定器,小鼠固定架的生产厂家有哪些?
来源:未知 |发布时间:2021-04-02 10:54|点击:
  解剖学观察
  
  待动物出现弓背、行动迟缓、精神萎靡和消瘦等濒死状态后,采用CO2窒息法处死动物,进行解剖。结果发现:全部16只小鼠的中轴骨和四肢骨关节处都有转移灶;膝关节被肿瘤组织包裹,明显突出,形状不规则,呈灰白色,表面质地略硬;肩关节、肩胛骨和中轴骨有明显凸起于骨质表面的肿瘤结节,呈圆形,颜色灰白,质地稍硬。全部小鼠均出现不同程度骨转移,其转移位置与小动物活体成像和Micro-CT显示位置基本-致,转移主要出现于肩关节、肩胛骨和膝关节为主的四肢骨和脊柱为主的中轴骨,肝、脾、肾及其他脏器均未见转移灶。
  小鼠固定架
  2.4组织病理学观察
  
  取小鼠肩胛骨、肋骨、股骨和胫骨等骨转移灶,进行包埋、固定、HE染色,光学显微镜下可见各转移灶中肿瘤细胞均穿破骨皮质并侵犯周围软组织,排列紊乱,形态不规则,且细胞分化差,核大且深染,核仁不明显。
  
  3讨论
  
  肺癌转移主要在骨、脑和肝脏等部位。其中,骨为肺癌转移的第一靶器官, 约占晚期肺癌的50%~70%171,主要分布在肋骨、脊柱、骨盆以及四肢骨等部位,绝大多数为溶骨性破坏,少数为成骨性破坏。肺癌骨转移灶的形成是一个多因素、多步骤的复杂生物学过程,目前具.体机制尚不清楚。进行肿瘤转移机制和防治研究时,肿瘤转移动物模型是必不可少的工具之一。
  
  然而,肿瘤动物模型与临床实际情况不同,动物模型一般较少发生转移,即使出现转移,其转移率也相对较低。在肺癌研究中,有关肺癌骨转移动物模型的研究报道总体较少。目前,根据已有文献报道,建立肺癌骨转移动物模型的方法主要有4种:肺原位移植法、尾静脉注射法、胫骨内注射法和左心室注射法。肺原位移植法和尾静脉注射法的主要转移部位都为肺,而骨转移相对较少发生10。胫骨内注射法是直接将肿瘤细胞注射入胫骨,尽管移植成功率较高,但缺少了肿瘤细胞经过血液途径发生转移的过程。左心室注射法是将肿瘤细胞直接注射入小鼠左心室,缺少了完整肿瘤转移过程中肿瘤细胞突破基膜的步骤。前期预实验时,在没有超声引导的情况下进行左心室注射,结果发现解剖小鼠后,约1/3的小鼠在心包膜附近、胸膜和剑状软骨等处发现瘤体,分析其原因可能是进针位置偏移或进针太浅,导致肿瘤细胞漏出,从而影响了建模成功率。
  
  本实验优化了传统盲打进行心内注射的操作方法,通过超声引导定位左心室,确定针进入左心室后再进行肺癌细胞注射;该方法有效地提高了建立肺癌骨转移小鼠模型的成功率,避免了心内注射的盲目性,防止动物急性出血。本研究建立的心内注射骨转移动物模型能够较好地模拟肿瘤细胞进入血液循环后随着血流到达骨的毛细血管床,穿过血管内皮间隙进入骨组织,再与骨组织微环境经过一系列相互作用,最终在骨内增殖并导致骨质重构的过程;这与肿瘤患者骨转移灶在生长、形态学上都非常相似,同时能够大幅度降低肿瘤细胞向实质脏器的转移率。因此,经超声引导建立心内注射骨转移动物模型是一种技术操作可行、建立骨转移模型较为有效的方法。在模型制作过程中,笔者根据实际经验分析发现,影响模型制作成功的因素主要有以下几点:
  
  (1)建模方法:常规心内注射因为采用盲打操作,会造成进针位置偏移,进针深浅的偏差会造成细胞漏出,在胸腔形成实体瘤;而运用超声引导介入后,通过更为准确的定位可以极大地提高建模成功率。
  
  (2)细胞直径:不同细胞的形态和直径有差异,当细胞注射到左心室后,细胞直径越大,越容易造成动脉栓塞,致使动物死亡。
  小鼠固定器
  (3)细胞状态:细胞状态越好,活力越高,增殖速度就越快,有利于提高建模成功率和转移发生率;
  
  (4)细胞本身的生物学特性:同- -种癌有不同细胞系,它们的转移能力存在较大差异,这主要与肿瘤细胞本身的生物学特性有关。本研究中小动物活体成像结果显示,与A549细胞相比,NCI-H1299细胞心内注射后的发光面积更大,发光强度更高,提示选用转移能力相对较强的细胞更有利于制作转移动物模型。
  
  (5)动物差异:本实验用了BALB/c-nu/nu小鼠和NOD/SCID小鼠两个品系的免疫缺陷动物作比较,结果发现,接种细胞密度相同时,免疫缺陷程度重的动物更易于发生肿瘤骨转移。因此,在建立转移动物模型时可适当选用重度联合免疫缺陷动物以提高肿瘤转移率。总之,在超声引导下心内注射人肺癌细胞建立骨转移动物模型是一种切实可行且有效的建模方法,能够成功获得骨转移灶,符合临床肺癌骨转移的特点,能够为肺癌骨转移的临床和基础研究提供新的实验工具和平台,具有一定的实际应用意义。

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